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本发明公开了黑曲霉、其α‑L‑鼠李糖苷酶制备方法及质粒载体及重组菌，所述α‑L‑鼠李糖苷酶来源于所述黑曲霉，所述α‑L‑鼠李糖苷酶核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过筛选获得水解柚皮苷的菌株黑曲霉WDQ‑1，并从其中获取了编码α‑L‑鼠李糖苷酶的基因，通过毕赤酵母高密度发酵，获得大量的α‑L‑鼠李糖苷酶，本发明构建重组菌毕赤酵母GS115/pPIC9K‑rha和GS115‑rha+vgb‑3，在3‑L发酵罐高密度发酵，发酵液产酶活性达到19000U/mL以上，展现良好的工业化前景。
