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一组GH16家族耐热β‑1,3‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其应用,所述突变体为BisGlu16B‑D47A、BisGlu16B‑D175A或BisGlu16B‑D47A/D175A,该突变体最适温度与野生型均保持一致,为60℃;Tm值较野生型提高2.3℃~4.3℃;65℃下的半衰期(t1/2)较野生型延长1.1~1.4倍;T50值较野生型提高0.5℃~3.0℃。热稳定性提高的同时催化效率并无损失。这样一种耐热、高催化的酸性β‑1,3‑1,4‑葡聚糖酶突变体,在啤酒酿造、饲料添加以及果汁澄清等领域具有较大的应用潜力。