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本发明公开了一种碳基荧光探针及其制备方法和应用,制备方法包括如下步骤:按比例称取5‑嘧啶硼酸溶于溶剂中,超声使其完全均匀分散后,装入聚四氟乙烯的高温反应釜中反应,自然冷却,离心清洗,即得。该方法通过简单的一步水溶剂热技术制备的CFNPs,量子效率高达45%,光学性能优异,且物化、光学稳定性好,通过高活性OH•和空穴B原子位点之间特异性置换反应而实现对血清中OH•高灵敏度检测,选择性较好,填补了碳基荧光材料在高活性自由基检测方面的空白;该方法绿色环保、方便快捷、制备工艺简单、操作条件温和,合成的CFNPs量子效率高,可应用于LED、活体成像及光学探针等领域,极大地扩宽了碳基纳米材料的应用范围。