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本发明公开了一种基于蛋白质组学测定古代牛毛微痕迹的方法,将古代牛毛微痕迹土样及表土层土样,生土层土样提取分离,通过采用二维电泳技术将蛋白质进行有效的分离同时比较三种样品的电泳结果,排除土壤中可能含有蛋白质的影响以及外界因素的干扰,将电泳结果中的条带割下来完成胶内酶切,然后进行质谱分析,根据质谱分析结果与蛋白质数据库中的氨基酸序列进行比较,即可实现蛋白质的鉴定。本发明采用蛋白质组学方法测定古代牛毛微痕迹,解决了普通分析测试在分析微痕迹残留物时束手无策的问题,通过蛋白质组学测定,准确的得到样品中的蛋白种类,判断微痕迹样品是否为牛毛微痕迹,一方面灵敏度高,操作简便,另一方面准确度高,样品使用量少。